牛，羊布鲁氏菌病抗体检测试剂盒(竞争ELISA)

布鲁氏菌病（brucellosis，Bru，布病）抗体检测试剂盒用于检测牛、羊、猪、犬等动物血清中的布鲁氏菌抗体。

本试剂盒采用竞争ELISA法，在酶标板条微孔上预包被布鲁氏菌抗原。在试验中，加入稀释液、待检血清与酶结合物，经过温育后，若样品中含有布鲁氏菌特异性抗体，则与酶结合物中的酶标记抗体竞争板孔中包被的抗原表位，温育后将多余的游离抗体通过洗涤去除；在微孔中加入TMB显色液，经酶催化产生的蓝色信号与样本中的抗体含量成反比，加入终止液终止反应后，用酶标仪450nm波长测定反应孔中的吸光度A值。

组份

需自备的设备及试剂

1. 微量移液器：10µl-100µl、100µl-1000µl。

2. 一次性移液器吸头。

3. 量筒：500ml。

4. 96孔板酶标仪。

5. 蒸馏水或去离子水。

6. 洗瓶或洗板机。

样品制备

取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。

洗涤液的准备

浓缩洗涤液使用前应恢复至室温，如有盐结晶，摇动使结晶的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。

注意事项

1. 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，应将试剂盒各组份放置室温至少1小时以上。使用前应摇匀，使用后放回2-8℃。

2. 不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。

3. 显色液和终止液对皮肤和眼可能有刺激性，使用时应该注意防护。

4. TMB（显色液）不要暴露于强光和避免接触氧化剂。

5. 检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中，并尽快置于2-8℃)。

6. 所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。

7. 严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。

8. 抗原包被板为一次性用品，不得重复使用；

操作步骤

1. 每次试验均设置阳性对照1孔、阴性对照2孔。

2. 每孔加入40ul样本稀释液；

3. 将样品和阴阳性对照品按10ul/孔加入孔内（移液器枪头请勿混用）；

4. 每孔加酶结合物50μl，轻微震荡混匀，盖上封板膜，置37℃温育60分钟。

5. 小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作浓度洗涤液每孔加250ul，后甩去孔内液体，以上步骤重复4-6次，最后在干净吸水纸上拍干。

6. 每孔加显色液100µl，混匀、盖上封板膜37℃闭光显色15分钟。

7. 每孔加终止液50μl，使反应终止，10分钟内测定结果。

结果判定

用酶标仪于450nm（630nm作参比波长）读取吸光度OD值。

试验成立的条件是：

阴性对照(N)OD值>0.5，同时阳性对照(P)阻断率>80%；

计算方法：

PI (阻断率)= {1 —（样品OD值 ÷ 阴性OD均值）}×100%

阴阳性判断：

PI(阻断率)>70%则判断为阳性；

PI≤70%则判断为阴性。

有效期

贮存方法： 2 - 8ºC下贮存。

有效期： 12个月。