小反刍兽疫抗体检测试剂盒（竞争ELISA）

羊小反刍兽疫（peste des petits ruminants virus,PPRV）抗体检测试剂盒用于检测血清中的PPRV抗体，评估羊小反刍兽疫疫苗免疫状况及感染羊的血清学辅助诊断。

本试剂盒采用竞争ELISA法，在酶标板条微孔上预包被小反刍兽疫抗原。在试验中，加入待检血清以及单抗工作液，经过温育后，若样品中含有特异性抗体，则与工作液中的的抗体竞争包被板上的抗原，经洗涤除去未结合的抗体和其它成分后，再加入酶标结合物，使酶与结合在板上的单抗反应，经洗涤除去未结合的酶结合物，在微孔板中加入TMB显色液，经酶催化产生的蓝色信号与样本中的抗体含量成反比，加入终止液终止反应后，用酶标仪450nm波长测定反应孔中的吸光度A值。

组份

需自备的设备及试剂

1.    微量移液器：10µl-100µl、100µl-1000µl。

2.    一次性移液器吸头。

3.    量筒：500ml。

4.    96孔板酶标仪。

5.    蒸馏水或去离子水。

6.    洗瓶或洗板机。

样品制备

取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。

洗涤液的准备

浓缩洗涤液使用前应恢复至室温，如有盐结晶，摇动使结晶的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。

注意事项

1.    试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，应将试剂盒各组份放置室温至少1小时以上。使用前应摇匀，使用后放回2-8℃。

2.    不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。

3.    底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性，使用时应该注意防护。

4.    TMB（显色液）不要暴露于强光和避免接触氧化剂。

5.    检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中，并尽快置于2-8℃)。

6.    所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。

7.    严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。

8.    抗原包被板为一次性用品，不得重复使用。

操作步骤

1.    每次试验均设置阳性对照1孔、阴性对照2孔。

2.    将样品稀释液按20ul/孔加入到微孔反应板内，之后将阴性对照、阳性对照、待检样品血清按30ul/孔加入孔内，再按50ul/孔加入单抗工作液,加完后震荡混匀（移液器枪头请勿混用）；

3.    盖上封板膜（可按实际需要自行裁剪），置37℃温育45分钟。

4.    小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作浓度洗涤液每孔加250ul，后甩去孔内液体，以上步骤重复5次，最后在干净吸水纸上拍干。

5.    每孔加酶结合物100μl，盖上封板膜，置37℃温育30分钟。

6.    小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗涤5次, 方法同4。切记最后在干净吸水纸上拍干。

7.    每孔加显色液100µl，混匀、盖上封板膜37℃闭光显色10分钟。

8.    每孔加终止液50μl，使反应终止，10分钟内测定结果。

结果判定

用酶标仪于450nm（630nm作参比波长）读取吸光度OD值。

试验成立的条件是：

阴性对照(N)OD值>0.6，阳性对照OD值/阴性对照OD均值<0.3；

计算方法：

S/N =  样品OD值/阴性对照OD均值

阴阳性判断：

S/N >0.55则判断为阴性；

S/N≤0.55则判断为阳性。

有效期

贮存方法： 2 - 8ºC下贮存。

有效期： 12个月。