H7亚型禽流感抗体检测试剂盒 （竞争ELISA，鸡、鸭、鹅等禽类通用）

介绍

H7亚型禽流感抗体检测试剂盒检测家禽、野禽等动物血清中的H7亚型禽流感抗体，用于评估禽流感疫苗免疫状况及感染禽类的血清学辅助诊断。

本试剂盒采用竞争ELISA法，在酶标板条微孔上预包被H7抗原，运用抗单克隆抗体与血清中的抗体竞争固相载体中的结合位点，从而间接检测血清中的抗H7抗体。在试验中，加入待检血清及抗单克隆抗体，经过温育后，若样品中含有H7病毒特异性抗体，则与包被板上的抗原结合，从而阻碍了单抗与抗原的结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后，再加入抗小鼠酶标二抗，与检测板上的抗原抗体复合物发生特异性结合，再经洗涤除去未结合的酶结合物；在微孔中加入TMB底物显色，样本的吸光度值与其所含有的抗体的含量成负相关，从而达到检测样品中抗体的目的。

组份

需自备的设备及试剂

1. 微量移液器： 0.5µl-10µl、10µl-100µl、100µl-1000µl。

2. 一次性移液器吸头。

3. 量筒：500ml。

4. 96孔板酶标仪。

5. 蒸馏水或去离子水。

6. 洗瓶或洗板机。

样品制备

取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。

洗涤液的准备

浓缩洗涤液使用前应恢复至室温，如有盐结晶，摇动使结晶的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。

注意事项

1. 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，使用前应摇匀，使用后放回2-8℃。

2. 不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。

3. 显色液和终止液对皮肤和眼可能有刺激性，使用时应该注意防护。

4. 显色液不要暴露于强光和避免接触氧化剂。

5. 检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中，并尽快置于2-8℃)。

6. 所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。

7. 严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。

操作步骤

1. 取预包被的检测板（根据样品多少，可拆开分次使用），待检验板条每孔均需加入样本稀释液40ul，然后将待检血清10μl加入检测板，同时设阴性2孔和阳性对照1孔，取阴性及阳性对照各10μl分别加入反应孔中；

2. 在样本以及阴阳性对照混匀后，每孔加入50μl单抗工作液。轻轻振匀孔中样品（勿溢出）。

3. 盖上封板膜，置37℃温育60分钟。

4. 小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，用洗涤液洗6次。每次用洗涤液注满板孔（约250μl），且每次需将洗涤液甩干。洗涤6次后在干净吸水纸上拍干。

5. 每孔加酶结合物100μl，盖上封板膜，置37℃温育30分钟。

6. 小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗涤6次, 方法同4。切记最后在干净吸水纸上拍干。

7. 每孔显色液100ul，盖上封板膜37℃闭光显色15分钟。

8. 每孔加终止液50μl，使反应终止，10分钟内测定结果。

结果判定

用酶标仪于450nm（630nm作参比波长）读取吸光度OD值。

试验成立的条件是：

阴性对照（N）OD均值>0.5；

阳性对照（P）OD值/阴性对照（N）OD均值 < 0.4。

计算方法：

样品OD值/阴性对照OD均值=S/N值。

阴阳性判断：

S/N值≥0.35则判断为阴性；

S/N值<0.35则判断为阳性。

有效期

贮存方法： 2 - 8ºC下贮存。

有效期： 12个月。