鸡传染性法氏囊病抗体检测试剂盒（竞争ELISA）

介绍

鸡传染性法氏囊病病毒抗体检测试剂盒检测鸡血清中的鸡传染性法氏囊病病毒中和抗体，用于评估养鸡场鸡传染性法氏囊病疫苗免疫产生的中和抗体的状况及感染鸡的血清学辅助诊断。

鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白具有一个构象依赖性（不连续）的中和抗原决定簇，研究发现针对这个抗原决定簇的抗体可以被动地保护鸡免受鸡传染性法氏囊病病毒的感染。本试剂盒采用竞争ELISA法，在酶标板条微孔上预包被鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白，运用抗VP2蛋白单克隆抗体与血清中的抗VP2蛋白抗体竞争固相载体中的VP2蛋白结合位点，从而间接检测血清中的抗VP2蛋白抗体。在试验中，加入待检血清及抗VP2蛋白的单克隆抗体，经过温育后，若样品中含有鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白特异性抗体，则与包被板上的抗原结合，从而阻碍了抗VP2蛋白单抗与抗原的结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入抗小鼠酶标二抗，与检测板上的抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶结合物；在微孔中加入TMB底物显色，样本的吸光度值与其所含有的抗VP2蛋白抗体的含量成负相关，从而达到检测样品中抗VP2蛋白抗体的目的。

组份

需自备的设备及试剂

1. 微量移液器： 0.5µl-10µl、10µl-100µl、100µl-1000µl。

2. 一次性移液器吸头。

3. 量筒：500ml。

4. 96孔板酶标仪。

5. 蒸馏水或去离子水。

6. 洗瓶或洗板机。

样品制备

取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。

洗涤液的准备

浓缩洗涤液使用前应恢复至室温，如有盐结晶，摇动使结晶的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。

抗VP2单抗工作液的准备（现配现用）

先计算好单抗工作液的用量，再将101倍浓缩的抗VP2单抗按1：101的体积比用单抗稀释液稀释（例如：900μl单抗稀释液中加9μl浓缩的抗VP2单抗，可以满足10个微孔的用量；每次稀释时应多稀释100μl，以避免加样时的损耗而造成液体量不足）。

注意事项

1. 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，使用前应摇匀，使用后放回2-8℃。

2. 不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。

3. 显色液和终止液对皮肤和眼可能有刺激性，使用时应该注意防护。

4. 显色液不要暴露于强光和避免接触氧化剂。

5. 检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中，并尽快置于2-8℃)。

6. 所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。

7. 严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。

操作步骤

1. 取预包被的检测板（根据样品多少，可拆开分次使用），加入待检血清10μl到检测板孔底，同时设阴性2孔和阳性对照1孔，取阴性及阳性对照各10μl分别加入反应孔中，立即加入90μl单抗工作液。轻轻振匀孔中样品（勿溢出）。

2. 盖上封板膜，置37℃温育30分钟。

3. 小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，用洗涤液洗5次。每次用洗涤液注满板孔（约250μl）。洗涤5次后在干净吸水纸上拍干。

4. 每孔加酶结合物100μl，盖上封板膜，置37℃温育30分钟。

5. 小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗涤5次, 方法同2。切记最后在干净吸水纸上拍干。

6. 每孔显色液100ul，盖上封板膜37℃闭光显色10分钟。

7. 每孔加终止液50μl，使反应终止，10分钟内测定结果。

结果判定

用酶标仪于450nm（630nm作参比波长）读取吸光度OD值。

试验成立的条件是：

阴性对照（N）OD值>0.5；

阳性对照（P）S/N值<0.4。

计算方法：

样品OD值/阴性对照OD均值=S/N值。

阴阳性判断：

S/N值≥0.5则判断为阴性；

S/N值<0.5则判断为阳性。

贮存方法： 2 - 8ºC下贮存。

有效期： 12个月。